产品货号：
BTN80815
中文名称：
BCA法蛋白定量试剂盒
英文名称：
BCA Protein Assay Kit
产品规格：
500次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid，二奎啉甲酸法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品，BCA法跟Lowry法的第一步完全相同，就是在碱性条件下，蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2，双缩尿)发生的反应，故又叫Biuret反应(Biuret反应本省就可以测定蛋白质浓度，目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步，Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物，通过分光在562nm处测定紫色化合物的量就可以精确定量蛋白质浓度。BCA 检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。
产品特点：
1．对各种常见的去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。
2．比Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
3．试剂稳定，室温可以放置两年。工作液1 天内有效。
4．线性范围在 20～2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL，需要选用超敏BCA。
5．最小测量体积为1-20μL。
6．终产物稳定，变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．可以检测最短到双肽，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
8．有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。
试剂盒组成：
储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期两年。
使用方法：
一：96 板操作模式
1．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代)：
2．计算BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量，然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如：计算出需要5mL工作液，实际按不少于5.5mL的量配制。
3．配制BCA工作液：按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A+100μl溶液B。
注意：取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀，溶液B非常容易形成沉淀，需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时，最初会出现淡绿色沉淀，轻微晃动沉淀即会消失，工作液最后成绿色，可以室温放置12 天，但需要将容器的盖子拧紧。
4．将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
5．37℃放置30分钟。
6．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，使光吸收值慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
7．在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
8．将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
9．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
10．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μl)，乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。
二：试管测定模式
1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL，样品的总体积从20μL 改为100μL，BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。
三：注意事项
1．BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育30分钟或更长。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：
4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
相关搜索：BCA法蛋白定量试剂盒，BCA Protein Assay Kit
产品特点：
1．对各种常见的去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。
2．比Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
3．试剂稳定，室温可以放置两年。工作液1 天内有效。
4．线性范围在 20～2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL，需要选用超敏BCA。
5．最小测量体积为1-20μL。
6．终产物稳定，变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．可以检测最短到双肽，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
8．有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 100ml |
| 溶液B | 2ml |
| BSA标准品(2mg/mL) | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期两年。
使用方法：
一：96 板操作模式
1．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代)：
| 编号 | BSA 标准(2ug/uL) | 待测样品(μL) | 样品缓冲液(μL) | 总体积(μL) | 蛋白含量(μg) |
| 0 | 0 | 0 | 20 | 20 | 0 |
| 1 | 1 | 0 | 19 | 20 | 2.0 |
| 2 | 2 | 0 | 18 | 20 | 4.0 |
| 3 | 4 | 0 | 16 | 20 | 8.0 |
| 4 | 8 | 0 | 12 | 20 | 16.0 |
| 5 | 12 | 0 | 8 | 20 | 24.0 |
| 6 | 16 | 0 | 4 | 20 | 32.0 |
| 7 | 20 | 0 | 0 | 20 | 40.0 |
| 样品1 | 0 | X | 补到20 | 20 | 未知 |
| 样品N | 0 | Y | 补到20 | 20 | 未知 |
2．计算BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量，然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如：计算出需要5mL工作液，实际按不少于5.5mL的量配制。
3．配制BCA工作液：按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A+100μl溶液B。
注意：取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀，溶液B非常容易形成沉淀，需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时，最初会出现淡绿色沉淀，轻微晃动沉淀即会消失，工作液最后成绿色，可以室温放置12 天，但需要将容器的盖子拧紧。
4．将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
5．37℃放置30分钟。
6．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，使光吸收值慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
7．在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
8．将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
9．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
10．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μl)，乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。
二：试管测定模式
1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL，样品的总体积从20μL 改为100μL，BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。
三：注意事项
1．BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育30分钟或更长。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：
| 名称 | 在此浓度下不受影响 |
| Ammonium Sulfate | 1.5 M |
| Brij-35 | 5.0% |
| CHAPS | 5.0% |
| EDTA | 10mM |
| Hepes | 100mM |
| Glycine，pH2.8 | 100mM |
| Guanidine HCl | 4.0 M |
| Tween 20、60、80 | 5.0% |
| SDS | 5.0% |
| Sodium Acetate pH5.5 | 200mM |
| Sodium Chloride(NaCl) | 1.0 M |
| Sucrose | 40% |
| Sodium Hydroxide(NaOH) | 0.1 M |
| NP-40 | 5.0% |
| Triton X-100 | 5.0% |
| Urea | 3.0 M |
4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。
相关搜索：BCA法蛋白定量试剂盒，BCA Protein Assay Kit